酵母单杂：研究蛋白质和特定DNA序列相互作用

DNA与蛋白质的相互作用是指顺式作用元件与反式作用因子的相互作用。反式作用因子即转录因子（transcriptionfactors ,  TF)。真核细胞内大量通过直接或间接结合顺式作用元件调节转录活性的蛋白质因子。

转录调节因子分为两类：

1.基本转录因子：是RNA聚合酶结合启动子所必需的，为所有mRNA转录启动共有。

2.特异转录因子：为个别基因转录所必需，决定该基因的时间、空间特异性表达，包括转录激活因子和抑制因子。

反式作用因子必须与顺式作用元件相结合，才能发挥其调节基因表达的作用。

技术原理

真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子由DNA特异性结合域和其他调控蛋白相互作用的激活域组成，即DNA结合结构域（DNA—binding domain, BD）和转录激活结构域(Activating domain，AD）。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点（UAS），而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFHD相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可将GAL4的DNA结合结构域置换为文库蛋白编码基因，只要其表达的蛋白能与目的基因相互作用，同样可通过转录激活结构域激活RNA聚合酶，启动下游报告基因的转录。

应用酵母单杂交体系已识别并验证了许多与目的DNA序列结合的蛋白质，同时单杂交技术还被应用于识别金属反应结合因子。正向与反向单杂交体系的结合，还可用于筛选阻碍DNA与蛋白质相互作用的突变的单个核苷酸。

应用场景

1.转录因子研究：研究转录因子与DNA序列的特异性结合。通过构建诱饵包含启动子或增强子序列，并与猎物中的转录因子相互作用，可以鉴定和验证转录因子-基因调控序列的相互作用关系。

2.DNA结合蛋白鉴定：鉴定与特定DNA序列相互作用的蛋白质。通过构建诱饵包含DNA结合序列，与猎物中的蛋白质相互作用，可以筛选和验证与该DNA序列特异性结合的蛋白质。

3.蛋白质相互作用网络：筛选和鉴定蛋白质间的相互作用关系，从而构建蛋白质相互作用网络。这有助于了解细胞内蛋白质相互作用的调控机制、信号传导途径和细胞过程的调节。

4.疾病相关蛋白质研究：研究与疾病相关的蛋白质相互作用。通过构建诱饵包含疾病相关基因的序列，与猎物中的蛋白质相互作用，可以鉴定潜在的疾病相关蛋白质相互作用。

5.药物筛选和靶点鉴定：筛选和鉴定与小分子化合物相互作用的蛋白质。通过将小分子化合物作为诱饵，与猎物中的蛋白质相互作用，可以评估潜在药物的靶点和相互作用机制。

技术要点

1.诱饵构造；

2.酵母感受态细胞制备；

3.诱饵菌株转化；

4.文库转化；

5.阳性克隆筛选；

6.验证与鉴定。

服务流程

酵母单杂文库筛选

酵母杂交文库构建

酵母杂交验证

产品优势

1.一站式辅助检测方便快捷，结论可靠；

2.多年文库构建经验，多种优化的Total RNA提取技术方案保证Total RNA的纯度和完整性，保证样本的多样性；

3.同时研究多个蛋白质相互作用，实现高通量筛选和分析，获得信息；

4.采用多重筛选步骤，减少非特异性相互作用的误报。

代表结果展示

(Chen et al., 2018, Plant,Cell & Environ)