EMSA实验

EMSA 称凝聚阻滞实验或凝胶电泳迁移率检测， 是一种用于研究转录因子和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术，能对各类转录因子的 DNA 结合活性进行定性和半定量分析，是一项研究细胞信号转导通路的关键实验技术。这一技术最初用于研究 DNA 结合蛋白，目前已用于研究 RNA 结合蛋白和特定的 RNA 序列的相互作用。

技术原理

EMSA 主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和 32P 同位素标记的DNA 或 RNA 探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或 RNA-复合物比非结合的探针 移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可能是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的 DNA 结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。

  在检测 RNA 结合蛋白时，依据目的 RNA 结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的 DNA 或 RNA 片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定 DNA 或 RNA 结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

应用场景

  1、研究 DNA 结合蛋白和其相关的 DNA 结合序列相互作用；

  2、可用于 DNA 定性和定量分析；

  3、用于研究 RNA 结合蛋白和特定的 RNA 序列的相互作用。

技术要点

  1、根据研究目的设计特异性探针实验组以及非特异性对照组；

  2、将设计好的探针与样本蛋白混合孵育，形成蛋白-探针复合物；

  3、进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，并将蛋白-探针复合物转移到膜上；

  4、在膜上检测、曝光成像，观察蛋白-探针复合物的位置，从而判断是否有蛋白与目标探针有互作。

服务流程

  1、细胞核蛋白或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白，依据实验设计每张膜至少提供50 ul，浓度大于0.5 mg/ml；
  2、探针序列，如无探针序列，请提供 DNA 结合蛋白相关信息或相关文献，便于生物技术人员设计探针；
  3、结合蛋白特异性抗体50 ul以上，浓度大于0.5 mg/ml。

产品优势

  1、一站式服务：提供蛋白表达到 EMSA 一站式服务，解决客户无法提供细胞核蛋白的困扰；

  2、服务贴心：帮助客户设计标记探针、非标记探针，让实验结果更严谨；

  3、个性化：根据客户需求，满足部分特殊客户的实验需求。

案例

(Fillebeen et al., 2014, J Vis Exp)