酵母双杂一对一验证

酵母可以提供一个体内真核系统，同时又兼具原核细菌系统的可操作性强、简单易用的优点。在酵母体内表达的蛋白质可以正确的折叠；提供中性pH内部环境；可以形成二硫键和其他真核系统共有的翻译后修饰。这些特点对于维持天然蛋白结构获得真实的蛋白质互作关系至关重要。同时，酵母可操作性强，并且已进行全基因组测序。利用同源重组可以很方便地直接在酵母中构建文库。酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid，简称Y2H）是一种强大的分子生物学技术，用于研究蛋白质-蛋白质相互作用。该方法利用了酵母遗传学原理和报告基因系统，在活体酵母细胞内直接检测两个潜在相互作用的蛋白质。酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法，因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。

技术原理

酵母转录因子GAL4包括两个结构域，分别为DNA结合结构域（DNA-binding domain, BD）和转录激活结构域（Activating domain, AD）。BD能够识别位于GAL4-responsive gene的上游激活序列（Upstream activating sequence, UAS）并与之结合，AD可以启动UAS下游的基因进行转录。当BD或AD单独作用时不能激活转录，只有AD和BD在空间上充分接近时，GAL4转录因子才具有活性并激活下游基因的转录。

该技术利用酵母转录因子GAL4的特性，将AD与X蛋白融合，BD与Y蛋白融合，如果X、Y互作形成蛋白复合物，那么AD与BD会在空间上充分接近，使GAL4转录因子激活并启动报告基因的转录。

应用场景

1.测试两种候选蛋白之间的相互作用；

2.比较野生型和突变型或亚型蛋白间的结合；

3.将确切的相互作用域定位在蛋白质上。

技术要点

1.诱饵蛋白构建；

2.猎物蛋白构建；

3.酵母感受态细胞制备；

4.诱饵菌株和猎物质粒转化；

5.阳性克隆筛选；

6.验证与鉴定。

服务流程

产品优势

1.转化效率高，较少假阴性；

2.设置严格的对照实验，排除假阳性和假阴性；

3.酵母杂交系统采用多个报告基因，且每个报告基因上游调控区各不相同，可大幅度减少假阳性；

4.报告基因整合到染色体上，使基因表达水平稳定，消除了由于质粒拷贝数变化引起基因表达水平波动而造成的假阳性；

5.严格设置点种验证实验菌体生长状态，进一步验证是否互作及互作强弱；

6.严格保存原始实验数据便于溯源。

代表结果展示

(Chen et al., 2018, Plant,Cell & Environ)