BiFC: 双分子荧光互补

双分子荧光互补（Bimo-lecular fluorescence complementation，简称BiFC）。该技术巧妙地将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。在绿色荧光蛋白GFP的基础上，也衍生出蓝色荧光蛋白BFP，青色荧光蛋白CFP和黄色荧光蛋白YFP等，这些荧光蛋白都可以用于BiFC实验。

技术原理

双分子荧光互补（Bimo-lecular fluorescence complementation，简称BiFC）技术巧妙地将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。

应用场景

1.研究蛋白之间的相互作用：通过 BiFC，已经很直观地观察到了多个蛋白之间存在相互作用；

2.蛋白相互作用的定位研究：不同的蛋白位于细胞的不同位置，BiFC技术能确定蛋白相互作用的准确位置。并且能够检测相互作用的蛋白稳定性，BiFC不仅能观测到细胞内较强相互作用，也能检测到比较弱的相互作用；

3.蛋白质构型的研究：BiFC系统还被用于蛋白质构象研究；

4.BiFC对细胞内的RNA可进行特异性标记。

技术要点

1.将含有目地基因的载体转入农杆菌中；

2.挑取含有目的载体的农杆菌单克隆并培养；

3.转移培养的农杆菌菌液至含有相应抗生素的LB培养基中扩大培养；

4.离心收集菌体；

5.等体积混合两种含有不同质粒的菌体，吸取菌液从叶片伤口处注射到叶片中，用记号笔标记烟草叶片水溃状区域；

6.成像。

服务流程

产品优势

1.适用于体内和体外蛋白相互作用的验证；

2.实验中的蛋白处于天然状态，并能直观观察蛋白相互作用在细胞中的定位；

3.实验周期短；

4.相对于FRET和BRET技术对仪器的要求高、数据处理复杂的情况，BiFC只需要荧光倒置显微镜，数据处理简单，只检测荧光的有无，背景干净，检测更灵敏，不依赖于其他次级效应；

5.还可以用于研究蛋白之间的弱相互作用或瞬间相互作用；

6.不需要蛋白有特别的理论配比，能检测到不同亚群蛋白间的相互作用。

代表结果展示

(Huang  et al., 2021,  Journal of Experimental Botany)